本产品是依据探针法荧光定量PCR原理研发的检测试剂盒，具备以下特点：

产品特性

1. 即开即用：用户只需提供样品DNA模板即可开始检测。

2. 高灵敏度：经过优化的引物和其他组分，确保检测灵敏度。

3. 提供阳性对照：帮助用户有效区分假阴性样品，确保检测结果的准确性。

4. 高特异性：引物设计基于中间普雷沃菌DNA序列的高度保守区域，避免与其他生物样本DNA发生交叉反应。

5. 定性与定量兼容：可用于定性和定量检测，定量检测时的线性范围至少可达5个数量级。

6. 经济实惠：产品足够进行50次20μL探针法荧光定量PCR反应。

7. 科研专用：本产品仅供科研使用，非临床诊断。

使用方法

一、DNA提取

在样本制备区，采用自选的方法提取和纯化样品DNA。本试剂盒与市面上大多数核酸提取试剂盒兼容。

二、稀释标准曲线样品

在样本制备区进行标准曲线的稀释操作，具体步骤如下（为避免污染，请在独立区域进行）：

1. 标记6个离心管，分别编号为7，6，5，4，3，2。

2. 每个管中加入45μL DEPC-H2O。

3. 在7号管中加入5μL 1×10E8拷贝/μL的阳性对照，震荡均匀，等待使用。

4. 按照上述方法逐步稀释至5号管，以获取6个不同浓度的标准曲线样品。

若不制作标准曲线，可将阳性对照稀释至1×10E5拷贝/μL使用。

三、试剂配制

根据待检样品的数量N，准备N+2个qPCR管，向每个PCR管中添加相关成分，详见使用说明书。

四、添加模板

在模板添加区，向qPCR管中添加2μL模板，按照阴性对照（DEPC-H2O）、待测样品模板和阳性对照的顺序进行，最后离心30秒，进行扩增反应。

五、扩增反应

将PCR管放置于PCR扩增仪器中，并依据说明书执行扩增程序。

六、结果分析

1. 若制作标准曲线，请将阳性对照浓度的log值与Ct值绘制标准曲线，并根据待测样品的Ct值推算其DNA浓度。

2. 若未制作标准曲线，依据以下标准判定样品结果：阳性对照的Ct值应<30且有明显的指数增长；阴性对照的Ct值应为38或无Ct值；待测样本Ct值若<35，则结果为阳性；若在35-38范围内，则需复检。

运输与保存

本产品需低温运输，存放在-20℃，保存期为一年。阳性对照应单独放置，避免与其他试剂发生污染。

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