## SV40转染人成骨细胞HFOB119培养指南

### 一、细胞培养条件

**细胞名称：** SV40转染人成骨细胞HFOB119

**生长特性：** 贴壁生长

**冻存条件：** 使用无血清冻存液（货号：C7001）

**培养体系：** DMEM/F12 + 03mg/ml G418 + 10% FBS

**传代方法：** 建议首次传代比例为1:2。每两天更换培养液。

**备注：** 建议用无菌离心管收集培养基，以备对比培养。如果对比培养效果不理想，建议直接选购我们的完全培养基。

### 二、细胞处理流程

收到细胞后，首先培养至良好状态，然后用完全培养液灌满细胞瓶并密封，这样是细胞运输的最佳方式。进行消毒时，可以用75%酒精喷洒整个细胞瓶，然后在超净台内进行无菌操作。将细胞瓶放置于33°C、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态后再进行后续处理。同时，使用显微镜观察细胞生长情况，并拍照保存（建议拍摄40x、100x、200x各一张），前三天的图片会作为重要的售后依据。未提供照片默认收到状态良好。建议在传代后，用原瓶的完全培养基培养一瓶，另一瓶使用自配的完全培养基，以便进行对比培养，换液时请将瓶盖稍微松动。

### 三、细胞培养步骤

**a. 细胞传代：**

在细胞未超过80%汇合度时，将完全培养液收集至离心管，保留5ml培养基并放入33°C、5% CO2的孵箱中。如果细胞密度超过80%，则进行细胞传代。具体步骤如下：

1. 弃去培养基，用不含钙、镁离子的PBS洗涤细胞1-2次。
2. 加入约1-2ml的0.25%胰蛋白酶消化液，放入33°C培养箱中消化1-2分钟，然后观察细胞变化。若细胞大部分变圆并脱落，迅速轻敲瓶子，加入5ml以上的完全培养基终止消化。
3. 轻轻吹打细胞以确保其完全脱落后吸出，并将悬液转移至15ml离心管中，在1000RPM下离心5分钟，弃去上清液，并补加1-2ml完全培养基重悬。
4. 按1:2的比例分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放回33°C、5% CO2的细胞培养箱中培养。

**b. 细胞冻存：**

1. 当细胞生长至覆盖培养瓶的80%时，弃去培养液并用PBS清洗细胞一次。
2. 添加约1ml的0.25%胰蛋白酶消化液，轻轻吹打使其脱落，再加入5ml完全培养基终止消化，转移至15ml离心管，在1000RPM下离心5分钟。
3. 弃上清，加入1ml的无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转移至冻存管中。
4. 将冻存的细胞直接放入-80°C冰箱，随后可转移至液氮罐中，需在-80°C存放24小时以上后再转入液氮罐。

**c. 细胞复苏：**

1. 从液氮中取出冻存管（请佩戴防护装备），迅速置于33°C水浴中解冻，直到管内无结晶，外壁用75%酒精擦拭。
2. 将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 弃上清，重悬于5ml完全培养基，接种至T25培养瓶，放入33°C、5% CO2的细胞培养箱中培养。
4. 第二天更换为新鲜的完全培养基继续培养。

### 四、注意事项

在运输过程中，细胞若贴壁不牢可能会发生脱落，这属于正常现象。如脱落数量较多，可采用以下方法：将培养瓶内的培养液收集至离心管，1000RPM离心5分钟，收集上清作过渡培养，添加1-2ml胰酶轻轻吹打以重悬，消化1-2分钟后加入5ml完全培养基终止消化。再离心，弃去上清，重悬于1-2ml完全培养基，按1:2比例进行分瓶传代（两个T25），最后放回33°C、5% CO2的细胞培养箱中培养。

### 五、售后条款

1）关于细胞出现问题的重发情况：

1. 细胞运输过程中遇到的各种问题，包括细胞丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等，均可重发。
2. 如发生细胞污染问题，请在收到产品48小时内提供真实实验结果，经核实后可重发。
3. 常温发货的细胞静置24小时后或干冰运输的细胞复苏24小时后，多数细胞未存活（需提供真实清晰的细胞状态照片），则可重发。
4. 若干冰运输的细胞在复苏24小时后或常温发货的细胞静置4小时且未开封后出现污染，亦可重发。
5. 如果细胞活性存在问题，请在收到产品7天内提供真实实验结果，使用台盼蓝染色法评估细胞活力，若核实后可重发。
6. 收到细胞当天及第2、3天需拍照，若3天内未告知，则视为产品合格。若出现问题时提供最近3天的照片，和详细的操作步骤，经技术人员核实后可重发，若为双方责任则各自协调处理。

2）不予重发的情况包括：

1. 客户造成的细胞污染，不予重发。
2. 客户不正确操作致细胞状态不佳，不予重发。
3. 使用非推荐培养体系导致的细胞状态不佳，不予重发。
4. 如细胞状态不佳且未提供最近3天的照片，不予重发。
5. 细胞培养过程中有其他处理行为，不予重发。
6. 如在收到2天内未告知问题，则不予重发。
7. 具体情况将另行评定。

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