尊龙凯时提供的人急性淋巴母细胞白血病细胞MKN45的培养说明书如下：

一、细胞培养条件

细胞名称：人急性淋巴母细胞白血病细胞MKN45

生长特性：悬浮生长

冻存条件：无血清冻存液（货号：C7001）

培养体系：1640（含NAHCO3 15g/L）+ 10% FBS + 1% P

传代方法：建议第一次采用1:2的传代比例，2天更换培养液。

备注：使用无菌离心管收集培养基瓶中的液体作为过渡对比培养，如对比培养效果不佳，建议直接购买尊龙凯时的完全培养基。

二、细胞处理建议

收到细胞后，培养至良好状态并灌满完全培养液后封口是运输细胞的最佳方法。在收到细胞后，用75%酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒后，放置于超净台内进行无菌操作。随后将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态再进行处理。使用显微镜观察细胞生长情况，并拍照记录（推荐拍摄40x、100x和200x倍数的图片）。前三天的照片是重要的售后依据，未提供照片即默认状态良好。传代后建议一瓶使用原瓶的完全培养基，另一瓶使用自制的培养基，以便进行对比培养，换液后轻拧瓶盖以保持通气。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

若细胞未超过80%汇合度，将培养瓶内的完全培养液收集至离心管中，保留5ml培养基于37℃、5% CO2孵箱中培养。若细胞密度超过80%，可进行传代，步骤如下：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS清洗细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶至培养瓶中，置于37℃培养箱消化1-2分钟，显微镜观察细胞消化情况，若大部分细胞变圆并脱落，迅速带回操作台，轻敲培养瓶后加入5ml以上的完全培养基终止消化。
3. 轻轻吹打细胞使其完全脱落后吸出，悬液转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟，弃去上清，再加入1-2ml完全培养基重悬。
4. 按1:2比例分瓶传代（两个T25瓶），补充5-8ml新的完全培养基，最后放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中。

b. 细胞冻存

1. 当细胞覆盖培养瓶的80%面积时，弃去培养液并用PBS清洗。
2. 添加0.25%胰蛋白酶至培养瓶中，倒置观察，待细胞回缩变圆后加入5ml完全培养液终止消化，轻轻吹打使细胞脱落，悬液转移至15ml离心管中，1000 RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，沉淀细胞后加入1ml尊龙凯时无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转入冻存管。
4. 将冻存细胞放入-80℃冰箱中，如需转入液氮罐，需在-80℃中保存24小时以上后转入液氮罐。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出冻存管（佩戴防护具），快速置入37℃水浴中解冻，直至冻存管中无结晶，然后用75%酒精擦拭外壁。
2. 将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000 RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，加入5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，放入37℃、5% CO2培养箱中。
4. 第二天更换新鲜的完全培养基继续培养。

四、注意事项

在运输过程中，部分细胞可能会因贴壁不牢而脱落，这属于正常现象。如脱落情况较严重，可收集培养液至离心管中，1000 RPM离心5分钟进行过渡培养。沉淀后加入1-2ml胰酶，轻轻吹打，消化1-2分钟后加入5ml完全培养基终止反应。再离心，弃去上清，补充1-2ml完全培养基重悬，并按1:2比例进行分瓶传代（两个T25），继续在37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。

五、售后条款

关于细胞问题的重发标准与不重发情况：

1. 细胞存在诸如运输丢失、瓶身破损、培养液漏液等问题可申请重发；
2. 如细胞污染，请在收到产品48小时内提供真实实验结果，核实后可重发；
3. 常温发货的细胞或干冰冻存发货的细胞，若在复苏后24小时内大部分细胞未存活（需提供相应状态照片），也可重发；
4. 如细胞因用户造成的污染、不当操作、非推荐培养体系等原因导致问题，则不予重发；
5. 客户需在收到细胞的当天及2、3天内拍照，如超过3天未告知则视为产品合格，4-7天内如发生问题需提供收到细胞前3天的照片，经过技术人员确认如为我方责任可重发。

如需更多信息，请访问尊龙凯时网站，获取专业帮助。